「DNBelab C系列高通量单细胞ATAC测序」 

snATAC - seq 是一项基于转座酶的染色质可及性测序技术。其原理是利用转座酶随机转座到细胞核内染色质的开放区域，同时添加接头，经过扩增构建文库，进而获取整个基因组中染色质开放区域的 DNA 序列。通过对染色质开放区域的 Motif 分析，能够挖掘出潜在的活跃转录因子、抑制子及其关联基因，助力深入探究基因调控机制 。

技术原理及实验流程

通过对微珠表面修饰，连接带有 Cell Barcode 的引物，以此对每个细胞释放的 mRNA 进行独特标记。在引物尾部设计 3 个 rG 碱基，使其能与游离 PolyT 捕获的 mRNA 杂交，进而在液滴内启动逆转录。 在逆转录酶和 TSO 序列的协同作用下，mRNA 的 5’端会合成 3 个 C 碱基，与磁珠引物尾部的 rG 碱基互补杂交，精准完成每条 mRNA 的 5’端序列捕获。随后，对 mRNA 进行全长序列扩增，扩增产物分为 3 份，分别用于 5’RNA 的片段化、加接头等文库制备，以及 TCR 或 BCR 的巢式 PCR 扩增及其他文库制备过程。

单细胞 ATAC-seq 先从组织或细胞中富集细胞核，随后运用 Tn5 转座酶切割染色质开放区。借助 DNBelab C4 单细胞设备，将转座后的细胞核与带标签磁珠包裹起来，于液滴内完成染色质开放区的富集与扩增。后续依照高通量测序流程制备文库并进行测序及生信分析。在操作时，转座后的细胞核投入芯片数量为 5,000 - 15,000，可获取 3,000 - 9,000 个细胞，双包率低于 5%，确保数据精准可靠 。

1. 单细胞或细胞核悬液制备：针对组织样本，可通过液氮速冻提取细胞核，或从新鲜组织分离高质量细胞用于实验，要求细胞核总数超 10 万个。

2. 酶处理提纯：将生成的液滴经过破乳后，利用 ATAC 反应体系进行酶处理，去除冗余片段；

3. PCR 扩增：对回收的 DNA 按照设置 PCR 反应体系及参数进行 PCR 扩增；

4. PCR 扩增产物纯化：将 PCR 产物使用磁珠完成纯化；

5. 文库质量检测：取 DNA 产物检测浓度及片段分布；

6. 上机测序：文库检测合格，上机测序。使用华大自主研发的国产化 DNBSEQ Tx 系列超高通量的测序仪进行测序。

实验流程