单细胞解离专题 | 脑样本解离方案全解

 图片来源：Weiskirchen S. Determination of copper poisoning in Wilson's disease using laser ablation inductively coupled plasma mass spectrometry. Ann Transl Med. 2019 Apr;7(Suppl 2):S72.

脑组织取样要求

 

• 所采集组织必须符合《涉及人的生命科学和医学研究伦理审查办法》 ；

• 组织离体后，剔除非关注的、坏死的部分，及时清洗2-3遍，保证组织表面无血污及染色剂；

• 取适量组织于保存管中，保证组织能被组织保存液完全浸没；

• 及时放入组织保存液中，保证组织没有经过冷冻，灼烧等处理；

• 在组织保存管上做好标记，用封口膜缠绕管口，避免漏液；

• 2-8℃恒温冷链寄送至实验室。

脑组织单细胞悬液制备

 

 

01 实验准备

 

 

离心管、细胞筛、移液枪、培养皿、无菌眼科剪/镊子、混合酶液、Percoll液、冰盒冰板，水浴锅、冷冻离心机、显微镜、荧光计数仪......

样本接收，拍照留存开始实验。

 

02 实验步骤

 

 

• 将寄送至实验室的脑组织从组织保存管中取出，用预冷的HBSS缓冲液清洗组织2-3遍，去除血污及不相关组织部位；

• 将组织装入1.5ml低吸附离心管中，并剪碎成肉糜状；

• 把剪好的组织悬液放入装有混合酶液的15ml低吸附离心管中，37℃震荡孵育10min；

• 消化结束后，用带滤芯的1ml移液器反复吹打组织-混合酶液直至无明显的组织块；

• 40μm滤网收集细胞悬液，离心；

• 去上清，裂红，离心；

• 在离心的过程中，配置Percoll去杂试剂（9份的Percoll®（GE Healthcare）+1份的D-PBS(Without Ca++ and Mg++)（10X））；

• 去上清后，细胞沉淀用7ml PBS缓冲液重悬，加入3ml配置好的Percoll去杂试剂，颠倒混匀后离心；

• 去上清，留沉淀，再次清洗一遍即可得到脑组织细胞悬液。

 

03 部分实验结果展示

 

 

脑组织单细胞核悬液制备

 

 

 

01 实验准备

 

 

 

离心管、细胞筛、移液枪、培养皿、无菌眼科剪/镊子、核分离液、冰盒，冷冻离心机、显微镜、荧光计数仪......

样本接收，拍照留存开始实验

 

02 实验步骤

 

 

• 组织预处理：将冷冻脑组织置于冰上，加入一定量的核分离液，并将组织剪成肉糜状；

• 核分离：加入一定体积的核分离液冰上孵育裂解5min，每2min颠倒混匀一次；

• 核过滤：孵育结束后将裂解后的悬液过滤，200g离心收集；

• 核富集：收集上清对核悬液进行二次富集，500g离心收集；

• 核清洗：用核清洗液重悬沉淀并定容离心，重悬后即得到脑组织细胞核悬液。

 

实践医学团队拥有众多疑难样本解离成功经验，为您提供一站式多组学服务！